笔迹鉴定是指具有知识的鉴定人，通过将检材与样本字迹的笔迹特征进行比较检验，对检材字迹的书写人或样本字迹的同一性进行检验和鉴别的知识。在司法文书检验中笔迹鉴定案件较多，其中签名笔迹鉴定更为常见，多出现于借条、欠款、遗嘱、担保、协议、合同等民事纠纷中。
笔迹鉴定中由于检材与样本在纸张、墨水、油墨、保存环境等方面的不同都会对鉴定结果产生决定性影响，鉴定机构自备的样本不可能满足与送检检材在纸张的种类及颜色，墨水、油墨的色料及染料的主要成份，保存环境的温度、湿度等方面都相同。因此，不能使用鉴定机构的自备样本进行文件制成时间鉴定。
笔迹鉴定的内容广泛且细致，它涉及对书写动作一般状况特征、文字布局特征以及书面语言特征的全面比较，旨在识别这些特征在检材与样本之间的相同与不同之处； 鉴定过程还会深入到单字或笔画单个特征的细微差别上，进行逐一比对。
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