Elisa试剂盒注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
ELISA试剂盒组成：
试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存
说明书1 份1 份
封板膜2 片(48)2 片(96)
密封袋1 个1 个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
终止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存
影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。
elisa试剂盒价格具有以下优点：
1)快速： 仅需传统夹心法ELISA 1/3的操作时间，1小时即可完成整个试验流程;
2)简单： 只需1个洗涤步骤;
3)灵活： 可单或同时检测总蛋白及磷酸化蛋白，可在同一板上检测不同的靶蛋白;
4)灵敏： 达到甚至超过行业标准，且结果一致性良好;
5)兼容： 常规比色法检测，实验室常规酶标仪读数;
ELISA试剂盒：准备与贮存
ELISA试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下，效期见试剂盒标签;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前，所有试剂平衡至室温，不同批次的试剂不能交换使用。
1. 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗体;微孔板固定于板架上，密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内;贮存于2-8℃至有效期。
2. 胎球蛋白A示踪抗体，1瓶，0.6 ml，浓缩，HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中;此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释;贮存于2-8℃至有效期。
3. 示踪抗体稀释液，1瓶，11ml，即用，Trizma盐酸溶于缓冲液;根据实验步骤用于示踪抗体稀释;贮存于2-8℃至有效期。
4. 试验缓冲液，浓缩，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐;建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释(如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水);贮存于2-8℃至有效期。
5. 洗涤液，浓缩，1瓶，20ml，30倍浓缩;试验前需用580ml的双蒸水稀释，混匀;一旦稀释，不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂;稀释的洗涤液在室温下可保存至效期。
6. HRP底物液;1瓶，12ml，含过氧化氢的TMB底物液;贮存于2-8℃至有效期。
7. 终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，贮存于2-8℃至有效期。
8. 胎球蛋白A标准品，5瓶，含胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质;各标准品浓度见瓶子标签;3次冻存周期使用后，所有标准品保存至-20℃或更低。
9. 胎球蛋白A质控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质，各质控的浓度范围见瓶子标签，3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低。
Elisa试剂盒有几种检测方法：
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤;
6.’后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。
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