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鸡纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒可提供技术指导

更新时间:2024-10-21 09:39:50 [举报]


鸡纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒 可提供技术指导




做好对照



正式试验时,应分别以阳性对照阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特反应,可采用羊、兔或BSA等封闭。



实验条件的选择



ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:



(1) 固相载体的选择:许多可作为固相载体,如聚氯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。



(2) 包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。



(3) 酶标记工作浓度的选择:用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验里准确地滴定其工作浓度。



(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。



进口分装:



检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。



试剂盒的曲线



试剂盒的曲线相关系数R≥0.98。



试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。



试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。



检测及酶结合物的稀释度(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,实验结果的重复性。



白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种形成,它的特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的等,也备受关注. 并且已证实白介素-6病理学存在的相关关系.例如,报道多种的生长因子为白介素-6, 瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性和自身发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94的 700 pg/mL 预期用途








ELISA的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或仍保持其学活性,酶标记的抗原或既保留其学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的或抗原)与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与中的其他分开。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定达到很高的度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。


鸡纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒 可提供技术指导



安全性



1. 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些,请尽快用水冲洗。



2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。



3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。



4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃,不可保存。



5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。



6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。



7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。



8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。



9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。



10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光,避免长时间于光下。避免用手,有毒。实验完成后应立即读取OD值。



11. 加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。



12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。



 



 

标签:elisa试剂盒酶联试剂盒
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