叶酸传统的合成路线是以硝基苯甲酸为原料经酰氯化、缩合、还原、环合而成。此工艺流程长、收率低、生产成本高。采用四甲氧基丙醇和对氨基苯甲酰-L-谷氨酸为主要原料与三氨基嘧啶硫酸盐反应生成叶酸，总收率75%，含量98%
与后一合成法相似，对氨基苯甲酰谷氨酸，三氯丙酮及2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶硫酸盐（[1603-20-7]），在乙酸钠和焦亚硫酸钠存在，保持pH3.4-3.6，温度36-40℃的条件下，环合反应6h，即得桔红色的叶酸沉淀。
如存在微量核黄素,则更易引起光分解。微溶于水(1.6mg/100ml),不溶于丙酮、乙醇、氯仿和乙醚,易溶于碱性氢氧化物和碳酸盐溶液、盐酸、硫酸、冰醋酸、苯酚、吡啶。10%水悬浮液的pH值约为4.0~4.8.
