鸡游离(F-TESTO)ELISA试剂盒
ELISA实验通用规则
1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。
7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。
8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。
做好对照
正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。
测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应，所以任何的诊断试剂离不开的原料，如抗原，酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原，而则为纯化抗原动物后的多克隆和使用杂交瘤技术的单克隆，而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定也不断出现。
ELISA测定结果如何计算.ELISA测定结果计算如下：1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。2.两个平均数的差(P-N)大于一个特定的数值，例如0.400，试验才有效。3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。4.阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05。5.标本A值>阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。需要注意的是，试剂盒的常数只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。
鸡游离(F-TESTO)ELISA试剂盒
实验条件的选择
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1） 固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
（3） 酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。
（4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
