线粒体柠檬酸(MCA）含量试剂盒紫外分光光度法说明书
紫外分光光度法 25管/24样 50管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
商品属性：
产品名称：线粒体柠檬酸(MCA）含量试剂盒紫外分光光度法
货号：LZ-S01147-A
规格 : 25管/24样 50管/48样
测试方法:紫外分光光度法
产品分类：三羧酸循环系列
发货地：上海
测定意义:
CA是线粒体三羧酸循环的个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理:
CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
酸性提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存。
标准品：液体 1mL×1 支，10μmol/mL 柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃
离心 5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
生化检测试剂盒操作步骤：
一、准备工具和环境：确保操作台面干净、整洁，这是进行科学实验的步。南京
二、仔细阅读说明书：这是使用试剂盒的基础，说明书包含了所有必要的信息和操作指南。
三、样本采集：按照说明书的指导，正确采集样本。不同类型的检测可能需要不同类型的样本，如血液、唾液或鼻涕等。
四、样本混合：将样本与试剂小心混合，注意轻柔操作，避免产生泡沫，以确保检测的准确性。
五、等待反应：混合后，耐心等待试剂盒的反应，这个时间可以用来进行其他活动，但不要着急，因为好的结果值得等待。
六、结果判读：时间到后，仔细判读结果。试剂盒通常会有明确的指示，告诉你如何根据显示的线条或颜色来判断结果。
公司正在出售的产品：
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注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。
