鸡FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒仅供科学研究
ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
组成结构：
1、 ：操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 ：EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠,EDTA,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)
ELISA测定结果如何计算.ELISA测定结果计算如下：1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。2.两个平均数的差(P-N)大于一个特定的数值，例如0.400，试验才有效。3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。4.阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05。5.标本A值>阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。需要注意的是，试剂盒的常数只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。
酶联吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或与酶的结合，形成酶标抗原或，保持其活性，同时又保留酶的活性。将抗原或与酶连接成酶标记抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在测定时，把受检标本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体表面的抗原或起反应形成固相化抗原-酶复合物，用洗涤的使固相载体上形成的抗原-酶复合物与其它成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被固相载体上的酶催化生为有色产物，通过定性或定量检测有色产物的量即可确定样品中待测的含量。
鸡FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒仅供科学研究
试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
安全性
1． 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃，不可保存。
5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光，避免长时间于光下。避免用手，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11． 加入试剂的顺序应一致，以所有反应板孔温育的时间一样。
12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
鸡FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒仅供科学研究
做好对照
正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。
实验条件的选择
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1） 固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
（3） 酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。
（4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
ELISA试剂盒检测中的注意事项
1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。
7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。
8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。
