线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶试剂盒微量法说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
商品属性：
产品名称：线粒体呼吸链复合体Ⅰ/NADH辅酶Q还原酶试剂盒微量法
货号：LZ-S016
规格 : 100管/96样
测试方法:微量法
产品分类：辅酶Ⅰ系列
发货地：上海
测定意义:
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O2还原生成O2.-，是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。
测定原理:
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂四：液体 25mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂五：液体 1mL×1 支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 2mL 蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存，
禁止反复冻融。
临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保
存，禁止反复冻融。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做）。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。
生化检测试剂盒操作步骤：
一、准备工具和环境：确保操作台面干净、整洁，这是进行科学实验的步。杭州
二、仔细阅读说明书：这是使用试剂盒的基础，说明书包含了所有必要的信息和操作指南。
三、样本采集：按照说明书的指导，正确采集样本。不同类型的检测可能需要不同类型的样本，如血液、唾液或鼻涕等。
四、样本混合：将样本与试剂小心混合，注意轻柔操作，避免产生泡沫，以确保检测的准确性。
五、等待反应：混合后，耐心等待试剂盒的反应，这个时间可以用来进行其他活动，但不要着急，因为好的结果值得等待。
六、结果判读：时间到后，仔细判读结果。试剂盒通常会有明确的指示，告诉你如何根据显示的线条或颜色来判断结果。
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注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。
